李冀等采用醋酸涂抹法及幽门结扎法复制大鼠消化性溃疡模型，在药效学基础上探讨四逆散抗溃疡的作用机制，结果发现四逆散对多种方法所致的急、慢性胃溃疡均有明显的治疗及预防作用，其机制可能与提高6-酮-前列腺素F1含量(6-keto-PGF1)、胃组织超氧化物歧化酶(SOD)水平和降低胃液总酸度、抑制胃组织丙二醛(MDA)水平有关。

而在黑斑病的实验组中，离体条件下并未观察到明显的抗病效果。3.3几丁质酶基因和-1，3-糖苷酶基因的表达谱分析RT-qPCR分析对峙培养第6d的烟管菌细胞壁裂解酶基因的表达水平结果表明在该阶段，多个基因表达量上调，如几丁质酶基因EVM0005032，EVM0003825和EVM0009013，-1，3-糖苷酶基因EVM0006890（图2）。

相关链接：链格孢，灰葡萄孢，纤维素酶。图2接种6d后烟管菌预测具有信号肽结构的细胞壁裂解酶基因相对表达量分析将烟管菌单独培养作为对照组。另外，同属B类几丁质酶基因的EVM0003825仅在与尖孢镰刀菌的对峙培养中出现明显的上调表达（图2d）。图3重组蛋白BaCHIB的纯化4讨论本研究通过离体和活体实验，证明了烟管菌对烟草灰霉病和赤星病具有良好的抗病效果。而另一种来自珊瑚球菌的几丁质酶，在浓度为0.15mg/mL和0.75mg/mL时，对稻瘟病菌分生孢子萌发抑制率分别在40%和10%左右。

F为尖孢镰刀菌.根据多重比较结果，不同字母表示差异显著（P0.05）。而来源于哈茨木霉的几丁质酶Chit46，在浓度为3.9g/mL时，对灰葡萄孢培养5d后的生长抑制能力为76%，表现出较上述两种几丁质酶更为高效的抑菌能力在本研究中，三种病原真菌在0.2mg/mL的几丁质酶溶液中培养2d后，新生菌丝生长被强烈抑制，证明烟管菌几丁质酶BaCHIB同样具有较好的抗真菌能力。配合在线的PDA检测器，-胡萝卜素组分可以在大多数样品中得到鉴定和定量。

二、盐藻源产胡萝卜素在保健食品中几何异构体组成的测定1、-胡萝卜素几何异构体组成的测定总-胡萝卜素的UV-VIS测定方法详见GB8821-2011和GB28310-2012。由于盐藻藻粉的含水量很低，不同原料中病原菌和有害微生物的数量均可控制在很低的水平。由于能在体内积累大量的-类胡萝卜素，盐藻及其提取物具有很强的抗氧化活性。D.salinaTeodor具有最高的-胡萝卜素含量(平均14％，w／w)，D.sp.SPMO980625-IE具有最高的藻油含量(平均37％，w/w)。

由于盐藻提取物为油溶性的脂类提取物，不同原料中病原菌和有害微生物均未检出。杜氏藻属的物种在形态上与莱茵氏衣原体(Chlamydomonasreinhardtii)相似，二者的区别在于：杜氏藻属的物种缺乏细胞壁和收缩液泡，有两条等长鞭毛和一个单杯状叶绿体，且常含有中央核，其中的叶绿体中含有大量的-胡萝卜素，使藻体呈桔红色。

目前，杜氏藻属(Dunaliella)中已鉴定了53种藻种。在我国，以内蒙古地区的盐湖基地为骨干，从盐藻中制备天然-胡萝卜素的产业已经发展成独立的产业体系。由于中央共轭多烯链的存在，使整个分子具有高度的不饱和性，可形成多种几何异构体。藻体的形状和对称性取决于环境条件。

1966年，前苏联建立了世界上第一个用于商业生产的盐藻源-胡萝卜素中试工厂。盐藻源-胡萝卜素在保健食品中几何异构体组成的测定尚未报道。经过上世纪90年代的研究，9Z-异构体独特的保健功能(如生物利用度高、增强免疫功能显著等)已渐被认知，成为人们研究的重点。盐藻缺乏坚硬的细胞壁，这使得生物体容易受到渗透压的影响。

另外，C30固定相较长的烷基链也增加了固定相的疏水性，导致非极性类胡萝卜素的保留时间增加，从而提高了柱效。它可有效地阻断细胞内的链式自由基反应，因而被认为是治疗和预防由此引起的许多顽疾的理想物质。

但是，-胡萝卜素几何异构体的分离在C18柱上遇到很大困难虽然在自然界中它经常以全反式异构体的形式存在，但也常见其13Z-和9Z-顺式异构体的存在。

所以，C30柱在分离几何异构体时显示出明显的优势。（1）几何异构体的分离众所周知，-胡萝卜素组分可以应用HPLC在C18柱上被很好地与其它类胡萝卜素组分分离。已经陆续成熟的提取方法有：(1)有机溶媒萃取法，包括：正己烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等萃取法，(2)超临界二氧化碳流体萃取法。由于C30烷基的链长与类胡萝卜素分子的长度接近，因而二者的相互作用得到了增强。配合在线的PDA检测器，-胡萝卜素组分可以在大多数样品中得到鉴定和定量。我国已颁布的新食品原料公告，要求盐藻提取物中-胡萝卜素的含量8％(w／w)。

由于中央共轭多烯链的存在，使整个分子具有高度的不饱和性，可形成多种几何异构体。3、盐藻源-胡萝卜素为了在高盐条件下生存，盐藻体内积累了高浓度的-胡萝卜素，以防止强烈的光照和高浓度的盐对细胞形成渗透压差造成的伤害。

由于盐藻藻粉的含水量很低，不同原料中病原菌和有害微生物的数量均可控制在很低的水平。-胡萝卜素分子由中央多聚烯链和两端的六元环末端基团组成，为双环结构，其全反式异构体呈几何中心对称。

但是，-胡萝卜素几何异构体的分离在C18柱上遇到很大困难。早在一个世纪前，人类就知道，-胡萝卜素可在哺乳动物的小肠中水解生成维生素A，进而参与视觉生理代谢。

由于盐藻的细胞壁很脆弱，且-胡萝卜素在其体内处于游离态，故上述萃取技术均可得到满意的-胡萝卜素转移率，一般可达到92％～95％(w／w)。D.salinaTeodor具有最高的-胡萝卜素含量(平均14％，w／w)，D.sp.SPMO980625-IE具有最高的藻油含量(平均37％，w/w)。因此，C18-HPLC-PDA已成为定性、定量检测-胡萝卜素的常用方法。-胡萝卜素类是良好的自由基猝灭剂，具有良好的抗氧化作用。

因此，它被称为维生素A原。另外，C30固定相较长的烷基链也增加了固定相的疏水性，导致非极性类胡萝卜素的保留时间增加，从而提高了柱效。

它可有效地阻断细胞内的链式自由基反应，因而被认为是治疗和预防由此引起的许多顽疾的理想物质。图1为惠伯棣等人发表的-胡萝卜素在C30-HPLC的分离色谱图。

经常用于生产-胡萝卜素的藻种是D.salina，含量为2％～14％(w／dw)。二、盐藻源产胡萝卜素在保健食品中几何异构体组成的测定1、-胡萝卜素几何异构体组成的测定总-胡萝卜素的UV-VIS测定方法详见GB8821-2011和GB28310-2012。

总-胡萝卜素的HPLC测定方法详见NY/T82.15-1988和DB64/T1514-2017。盐藻由罗马尼亚人E.C.Teodoresco首次发现，并在1838年首次被法国MichelFelixDuIlal报道。1966年，前苏联建立了世界上第一个用于商业生产的盐藻源-胡萝卜素中试工厂。在我国，以内蒙古地区的盐湖基地为骨干，从盐藻中制备天然-胡萝卜素的产业已经发展成独立的产业体系。

由于盐藻提取物为油溶性的脂类提取物，不同原料中病原菌和有害微生物均未检出。2、-胡萝卜素-胡萝卜素是一种类胡萝卜素，其习惯命名为-胡萝卜素，半系统命名为-胡萝卜素，分子式为C40H56，CAS号为7235-40-7。

盐藻及提取物中重金属的检测指标包括铅、砷和汞(以铅计)。各类胡萝卜素组分的鉴定也已建立。

盐藻源-胡萝卜素在我国以及全世界的保健食品中有着一定的应用前景。C30柱的出现为-胡萝卜素几何异构体的分离提供了新的选择。

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